主营产品：
生化试剂，标准品,对照品，PCR试剂盒， 核酸检测试剂盒，荧光定量检测试剂盒，生化试剂盒 ，比色法试剂盒，酶活性检测试剂盒，ELISA试剂盒，酶联免yi检测试剂盒，试剂盒，ELISA试剂盒，抗体，重组蛋白，分光光度法检测试剂盒，细胞株，原代细胞，细胞培养基，标准溶液产品。代理并销售进口SIGMA试剂、abcam抗体、R&D抗体、CST抗体、ATCC细胞、BD公司、GE公司、赛默飞世尔公司产品。
咨询电话：18117197628
杀灭曲线的建立
日期：2025-05-03 01:50
浏览次数：153
摘要：
为了筛选得到稳定表达目的蛋白的细胞株，需要确定能够杀死未转染宿主细胞的抗生su浓度，可通过建立杀灭曲线（剂量反应曲线）来实现，至少选择5个浓度。
1、 第1天：未转化的细胞按照20-25%的细胞密度铺在合适的培养板上，37℃，CO2培养过夜；注：对于需要更高密度来检测活力的细胞，可增加接种量。
2、 根据细胞类型，设定合适范围内的浓度梯度。以哺乳动物细胞为例，可设定50，100，250，500，750，1000μg/mL。先用去离子水或者PBS buffer按照1:10的比例将母液稀释到5 mg/ml，然后按照下表稀释...
为了筛选得到稳定表达目的蛋白的细胞株，需要确定能够杀死未转染宿主细胞的抗生su浓度，可通过建立杀灭曲线（剂量反应曲线）来实现，至少选择5个浓度。
1、 第1天：未转化的细胞按照20-25%的细胞密度铺在合适的培养板上，37℃，CO2培养过夜；注：对于需要更高密度来检测活力的细胞，可增加接种量。
2、 根据细胞类型，设定合适范围内的浓度梯度。以哺乳动物细胞为例，可设定50，100，250，500，750，1000μg/mL。先用去离子水或者PBS buffer按照1:10的比例将母液稀释到5 mg/ml，然后按照下表稀释到相应浓度的工作液。
3、 第2天：替换旧的培养基，换用新鲜配制的含有相应浓度药wu的培养基。每个浓度做三个平行孔。
4、接下来每3-4天更换新的含药wu培养基。
5、 按照固定的周期（如每2天）进行活细胞计数来确定阻止未转染细胞生长的恰当浓度。选择在理想的天数（通常是7-10天）内能够杀死绝大多数细胞的浓度为稳定转染细胞筛选用的工作浓度。