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一抗是属于哪个类或亚类确定指引
日期:2025-05-03 01:48
浏览次数:381
摘要:
除了要与一抗的种属来源相一致,二抗还需与一抗的类别或亚类相匹配,这通常是针对单克隆抗体而言。一般来说多克隆抗体主要是IgG类免 疫球蛋白,因此相应的二抗就是抗IgG抗体。而单克隆抗体则相对复杂些,由于单克隆抗体有不同的类别和亚型,因此相应的二抗也需要根据这些亚型进行选择。
单克隆抗体的类别及亚类通常会在产品说明书中都会有描述,如果您的一抗是小鼠IgM,那么相应的二抗就应当是抗小鼠IgG抗体。如果单克隆一抗是小鼠IgG的某一亚类(IgG1,IgG2a,IgG2b,IgG3),那么几乎所有的抗小鼠IgG都可以与之结合,...
除了要与一抗的种属来源相一致,二抗还需与一抗的类别或亚类相匹配,这通常是针对单克隆抗体而言。一般来说多克隆抗体主要是IgG类免 疫球蛋白,因此相应的二抗就是抗IgG抗体。而单克隆抗体则相对复杂些,由于单克隆抗体有不同的类别和亚型,因此相应的二抗也需要根据这些亚型进行选择。
单克隆抗体的类别及亚类通常会在产品说明书中都会有描述,如果您的一抗是小鼠IgM,那么相应的二抗就应当是抗小鼠IgG抗体。如果单克隆一抗是小鼠IgG的某一亚类(IgG1,IgG2a,IgG2b,IgG3),那么几乎所有的抗小鼠IgG都可以与之结合,或者您也可以选择专门针对这一亚类的二抗,例如,如果您的一抗是小鼠IgG1,那么您可以选择抗IgG1的二抗,此种抗体在双标记实验中尤其适合。在不清楚一抗为何种类/亚类的情况下,可以选用抗相应物种IgG,因为此种抗体可以识别大多数类型的IgG免 疫球蛋白。
下面总结了几种具有不同特异性的二抗:
单克隆抗体的类别及亚类通常会在产品说明书中都会有描述,如果您的一抗是小鼠IgM,那么相应的二抗就应当是抗小鼠IgG抗体。如果单克隆一抗是小鼠IgG的某一亚类(IgG1,IgG2a,IgG2b,IgG3),那么几乎所有的抗小鼠IgG都可以与之结合,或者您也可以选择专门针对这一亚类的二抗,例如,如果您的一抗是小鼠IgG1,那么您可以选择抗IgG1的二抗,此种抗体在双标记实验中尤其适合。在不清楚一抗为何种类/亚类的情况下,可以选用抗相应物种IgG,因为此种抗体可以识别大多数类型的IgG免 疫球蛋白。
下面总结了几种具有不同特异性的二抗:
针对整个抗体分子(H+L)具有特异性:
如anti-IgG(H+L),此类抗体既可以与抗体的重链结合也可以与轻链结合,即与抗体分子的Fc,F(ab')2/Fab部分均可反应,anti-IgG(H+L)也可以与其他免 疫球蛋白家族反应(如IgM和IgA),因为所有的免 疫球蛋白都具有相同的轻链(κ链或λ链)。
针对Fab片段具有特异性:
这类抗体与重链轻链均可以结合,由于它们可以与轻链反应,它们同时也可以和具有相同轻链的其他种类的免 疫球蛋白反应。
针对Fc片段或重链具有特异性:
这类抗体和重链的Fc部分反应,因此它们是类别特异性的。即gamma链特异性抗体只与IgG反应,mu链特异性抗体只识别IgM,依此类推。
轻链(lambda,kappa)特异性:
与所有类别的抗体反应,因为所有类别的抗体均具有相同的lambda链或kappa链。
经过吸附处理的二抗:
不同来源的免 疫球蛋白含有相似的结构,抗一个物种的抗体可能与其他物种发生交叉反应,因此有些二抗经过了动物或人类IgG吸附处理,以减少非特异性背景。例如,如果是小鼠的组织或细胞,那么选择经小鼠血清或IgG吸附处理过的二抗可以减少非特异性结合。但是此种抗体识别表位的数量被大大减少。
如anti-IgG(H+L),此类抗体既可以与抗体的重链结合也可以与轻链结合,即与抗体分子的Fc,F(ab')2/Fab部分均可反应,anti-IgG(H+L)也可以与其他免 疫球蛋白家族反应(如IgM和IgA),因为所有的免 疫球蛋白都具有相同的轻链(κ链或λ链)。
针对Fab片段具有特异性:
这类抗体与重链轻链均可以结合,由于它们可以与轻链反应,它们同时也可以和具有相同轻链的其他种类的免 疫球蛋白反应。
针对Fc片段或重链具有特异性:
这类抗体和重链的Fc部分反应,因此它们是类别特异性的。即gamma链特异性抗体只与IgG反应,mu链特异性抗体只识别IgM,依此类推。
轻链(lambda,kappa)特异性:
与所有类别的抗体反应,因为所有类别的抗体均具有相同的lambda链或kappa链。
经过吸附处理的二抗:
不同来源的免 疫球蛋白含有相似的结构,抗一个物种的抗体可能与其他物种发生交叉反应,因此有些二抗经过了动物或人类IgG吸附处理,以减少非特异性背景。例如,如果是小鼠的组织或细胞,那么选择经小鼠血清或IgG吸附处理过的二抗可以减少非特异性结合。但是此种抗体识别表位的数量被大大减少。