主营产品：
生化试剂，标准品,对照品，PCR试剂盒， 核酸检测试剂盒，荧光定量检测试剂盒，生化试剂盒 ，比色法试剂盒，酶活性检测试剂盒，ELISA试剂盒，酶联免yi检测试剂盒，试剂盒，ELISA试剂盒，抗体，重组蛋白，分光光度法检测试剂盒，细胞株，原代细胞，细胞培养基，标准溶液产品。代理并销售进口SIGMA试剂、abcam抗体、R&D抗体、CST抗体、ATCC细胞、BD公司、GE公司、赛默飞世尔公司产品。
咨询电话：18117197628
PCR反应条件控制
日期：2025-05-31 12:18
浏览次数：35
摘要：
PCR反应条件控制：
1、PCR反应的缓冲液提供合适的酸碱度与某些离子 。
2、镁离子浓度总量应比dNTPs的浓度高，常用1.5 mmol/L。
3、底物浓度dNTP以等摩尔浓度配制，20～200 μmol/L。
4、TaqDNA聚合酶2.5U(100 μl）。
5、引物浓度一般为0.1 ～0.5 μmol/L。
6、反应温度
a. 变性温度和时间95℃，30s。
b. 退火温度和时间 低于引物Tm值5℃左右，一般在45～55℃。
c. 延伸温度和时间72℃，1 min/kb(10 kb内）。
d. Tm值=4(G+C) +2(A+T...
PCR反应条件控制：
1、PCR反应的缓冲液提供合适的酸碱度与某些离子 。
2、镁离子浓度总量应比dNTPs的浓度高，常用1.5 mmol/L。
3、底物浓度dNTP以等摩尔浓度配制，20～200 μmol/L。
4、TaqDNA聚合酶2.5U(100 μl）。
5、引物浓度一般为0.1 ～0.5 μmol/L。
6、反应温度
a. 变性温度和时间95℃，30s。
b. 退火温度和时间 低于引物Tm值5℃左右，一般在45～55℃。
c. 延伸温度和时间72℃，1 min/kb(10 kb内）。
d. Tm值=4(G+C) +2(A+T)
7、循环次数：一般为25～30次。循环数决定PCR扩增的产量。模板初始浓度低，可增加循环数以便达到有效的 扩增量。但循环数并不是可以无限增加的。一般循环数为30个左右，循环数超过30个以后，DNA聚合酶活性逐渐达到饱和，产物的量不再随循环数的增加而增加，出现了所谓的“平台期”。