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PCR扩增DNA片段具体步骤
日期：2025-06-17 00:18
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摘要：
PCR扩增DNA的原理基于体外快速扩增特定DNA片段的技术。具体步骤包括：
1. 变性：在高温下（通常9498°C），双链DNA解旋成单链。这是通过破坏碱基间的氢键实现的。
2. 退火：温度降低到5065°C，引物与模板DNA的单链结合，形成引物模板复合体。引物是根据目标DNA序列设计的短序列。
3. 延伸：温度升高到72°C，DNA聚合酶（如Taq DNA聚合酶）催化下，以四种脱氧核糖核苷酸（dNTPs）为原料，按照碱基互补配对原则，从引物的3'端开始合成新的DNA链，直到遇到另一个引物。
4. 循环：这三个步骤反...
PCR扩增DNA的原理基于体外快速扩增特定DNA片段的技术。具体步骤包括：
1. 变性：在高温下（通常9498°C），双链DNA解旋成单链。这是通过破坏碱基间的氢键实现的。
2. 退火：温度降低到5065°C，引物与模板DNA的单链结合，形成引物模板复合体。引物是根据目标DNA序列设计的短序列。
3. 延伸：温度升高到72°C，DNA聚合酶（如Taq DNA聚合酶）催化下，以四种脱氧核糖核苷酸（dNTPs）为原料，按照碱基互补配对原则，从引物的3'端开始合成新的DNA链，直到遇到另一个引物。
4. 循环：这三个步骤反复进行，每一轮循环中，新的DNA链可以作为下一轮循环的模板，从而实现目标DNA片段的指数级扩增。
通过25到30次循环，理论上可以将特定DNA片段扩增到10^6倍，足以用于后续的实验分析。PCR技术的高灵敏度和特异性使其成为分子生物学研究中的重要工具。