产品名称：GP73人高尔基蛋白73ELISA试剂盒说明书

服务：
      我们可以根据您的应用需要，比如在检测范围、种属以及灵敏度等方面有特殊要求，而量身定制检测试剂盒，有效控制检测试剂成本。并可提供免费代测。

优势特点：产品仅用于科研
1.高效、灵敏、特异的抗体；
2.稳定的重复性和可靠性；
3.吸附性能好，空白值低，孔低透明度高的固相载体；
4.使用血清、血浆、组织匀浆液、细胞培养液、尿液、唾液等等多种标本类型；
5.节省实验经费。 

组成及试剂配制 :
1. 酶联板：一块(96孔) 
2. 标准品(冻干品)：2瓶，每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml，盖好后静置10分钟以上，然后反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为100 ng/ml，做系列倍比稀释(注：不要直接在板中进行倍比稀释)后，分别稀释成100 ng/ml，50 ng/ml，25 ng/ml，12.5 ng/ml，6.25 ng/ml，3.12 ng/ml，1.56 ng/ml，样品稀释液直接作为标准浓度0 ng/ml，临用前15分钟内配制。
如配制50 ng/ml标准品：取0.5ml (不要少于0.5ml ) 100 ng/ml的上述标准品加入含有0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3. 样品稀释液：1×20ml/瓶。
4. 检测稀释液A：1×10ml/瓶。
5. 检测稀释液B：1×10ml/瓶。
6. 检测溶液A：1×120ul/瓶(1:100)临用前以检测稀释液A 1:100稀释，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制(100ul/孔)，实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如10ul检测溶液A加990ul检测稀释液A的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。
7. 检测溶液B：1×120ul/瓶(1:100)临用前以检测稀释液B 1:100稀释。稀释方法同检测溶液A。
8. 底物溶液：1×10ml/瓶。 
9. 浓洗涤液：1×30ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。 
10. 终止液：1×10ml/瓶(2N H2SO4)。

样本实验前准备：
ELISA试剂盒液体样本：包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清等。
（1）血清
室温血液自然凝固10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
（2）血浆：
应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
（3）尿液：
用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。
（4）细胞培养上清：
检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。
（5）培养细胞
检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融或加入组织蛋白萃取试剂，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
（6）组织标本
切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），或组织蛋白萃取试剂, 用手工或匀浆器将标本匀浆化。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。
注意事项：
1． 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2． 浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3． 各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间控制在5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4． 请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD 值大于标准品孔孔的OD 值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n 倍）后再测定，计算时请后乘以总稀释倍数（×n×5）。
5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6． 底物请避光保存。
7． 严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8． 所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9． 本试剂不同批号组分不得混用。
异鼠李素(标准品）质量规格：HPLC≥98%,标准品Isorhamnetin  英文名称MouseTATELISAKit小鼠凝血酶-抗凝血酶复合物(TAT)规格：96T/48T  大鼠孕/孕酮(PROG)ELISA试剂盒 ，英文名： PROG ELISA Kit

异鼠李素-3-O-葡萄糖苷(标准品)质量规格：HPLC≥98%，标准品Isorhamnetin-3-O-β-D-Glucoside  WoodyPla完全培养基500毫升溶液/片剂  人末端补体复合物C5b-9(TCCC5b-9)ELISA检测试剂盒HumaerminalcomplemecomplexC5b-9,TCCC5b-9ELISAKit 96T/48T

异鼠李素-3-O-新橙皮苷(标准品)质量规格：HPLC≥98%，标准品Isorhamnetin-3-O-neohespeidoside  rabbitprocollagenⅢN-terminalpeptide,PⅢELISA试剂盒兔子Ⅲ型前胶原氨基端肽(PⅢ)ELISA试剂盒规格：96T/48T  大鼠白介素21(IL-21)试剂盒 Rat Ierleukin 21,IL-21 ELISA Kit

异土木香内酯（标准品）质量规格：HPLC≥98%，标准品Isoalantolactone  小鼠白介素10(IL-10)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装  CLIAKitfoFPIELISAKit大鼠组织因子途径抑制物规格：48T/96T
蒜氨酸(标准品)Alliin质量规格：HPLC≥98%，标准品  冰冻切片组织BAX蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒10/20  登革热病毒通用型(DFV-U)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法) 48T

L-脯氨酸L-Proline质量规格：>99%,BR  RatClusterofdiffereiation3,CD3ELISA试剂盒大鼠CD3分子(CD3)ELISA试剂盒规格：96T/48T  HumanProteinSELISA试剂盒人蛋白S(ProteinS)ELISA试剂盒规格：96T/48T

DL-缬氨酸DL-Valine质量规格：>99%,BR  小鼠血小板/内皮细胞粘附分子1(PECAM1)ELISA试剂盒 ，英文名： PECAM1 ELISA Kit  ELISAKitapo-A1小鼠载脂蛋白A1规格：48T/96T

 L-亮氨酸(标准品)  L-Leucine 质量规格：HPLC≥98%，标准品   牛1酸烯醇式酸羧激酶(PCK)ELISA检测试剂盒Bovinephosphoenolpyruvatecarboxykinase,PCKELISAKit 96T/48T  Humancolony-stimulatingfactor，CSFELISAKit人集落刺激因子(CSF)ELISA试剂盒规格：96T/48T
芦荟新甙D(标准品)Aloeresin D质量规格：HPLC≥98%,标准品  牛状腺原氨酸(T3)试剂盒 Bovine i-iodothyronine,T3 ELISA Kit  人可溶性血管内皮细胞蛋白C受体(sEPCR)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装

罗汉果皂苷V(标准品)Mogroside Ⅴ质量规格：HPLC≥98%，标准品  英文名称Humahyroid-PeroxidaseELISAKit人甲状腺过氧化物酶(TPO)规格：96T/48T  小鼠凝血酶原片段F1+2(F1+2)试剂盒 Mouse prothrombin fragme 1+2,F1+2 ELISA Kit

络塞维（标准品）Rosavin质量规格：HPLC≥98%，标准品  动物多核白细胞分离试剂盒10  坏死因子相关凋亡诱导配体受体2(AIL-R2/DR5)ELISA试剂盒 ，英文名： AIL-R2/DR5 ELISA Kit

落新妇苷(标准品)Astilbin质量规格：HPLC≥98%，标准品  RatplateletmembraneglycoproteinⅡbⅢa,GP-ⅡbⅢaELISA试剂盒大鼠血小板膜糖蛋白ⅡbⅢa(GP-ⅡbⅢa/CD41+CD61)ELISA试剂盒规格：96T/48T  Humaumornecrosisfactor-relatedapoptosis-inducingligand1,AIL-R1ELISA试剂盒人坏死因子相关凋亡诱导配体1(AIL-R1)ELISA试剂盒规格：96T/48T
GP73人高尔基蛋白73ELISA试剂盒说明书操作流程：
（1）待测样品孔中每孔加入待测样品100μl，每种样品设3个平行孔；设两个阴性对照孔，每孔加未处理组的细胞裂解液100μl；另设一个空白对照孔，加入纯细胞裂解液100μl。 
（2）酶标板置4℃，包被过夜。
（3）洗板：吸干孔内反应液，用洗涤液过洗一遍（将洗涤液注满板孔后，即甩去），之后将洗涤液注满板孔，浸泡1-2分钟，间歇摇动。甩去孔内液体后在吸水纸上拍干。重复洗涤3-4次。
（4）阴性对照孔每孔加入PBS 50μl，样品孔及空白孔每孔加入1:500稀释的兔抗人AIF抗体工作液50μl。 
（5）酶标板置37℃培养箱的湿盒内，孵育60min。 
（6）洗板，同（4）。 
（7）每孔加1:5000稀释的HRP-标记的山羊抗兔抗体工作液 100μl。 
（8）酶标板置37℃培养箱的湿盒内，孵育60min。 
（9）洗板，同（4）。 
（10）每孔加TMB显色液 100μl，轻轻混匀10s，置37℃暗处反应15-20min。 
（11）每孔加100μl 2mol/L H2SO4终止反应。 
（12）分别测450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2，终测得的OD值为两者之差（W1-W2），以减少由容器上的划痕或指印等造成的光干扰。
（13）数据处理：在得出标本（S）和阴性对照（N）的 OD值后，计算S/N值。S/N≥2.1为阳性判定标准。