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试剂和样本的控制方法:
一、试剂
1.试剂的选择:国家明确要求要采用批批检定的形式对ELISA试剂严格把关,我司严格按照国家标准进行生产,已获得国家承认的“三证”,每一个产品都有对应的生产批号,只要客户提前下单,我们就能为您提供新批次的产品,不必担心会有过期的试剂。我司的试剂,值得您选择。
2.试剂的准备:先将试剂盒先从冰箱中拿出来,在室温下放置20-30
min后,再进行测定,使试剂盒在使用前与室温平衡,这样做的目的能使反应微孔内的温度较快地达到所需的温度,以满足后面的测定需求。
二、样本
1.内源性干扰因素:包括类风湿因子、补体、高浓度的非特异球蛋白、异嗜性抗体、某些自身抗体等;
类风湿因子的控制方法:
①用F(ab)2替代完整的IgG;
②标本用联有热变性IgG的固相吸附剂处理;
③检测抗原时,可用2-巯基乙醇加入到标本稀释液中使RF降解。
下列是公司产品ELISA试剂盒的详细说明书:
中文名称:IL1ε人白介素1εelisa试剂盒
英文简称:Human Interleukin 1 Epsilon(IL1e)ELISA Kit
产品货号:PH102741
规格:96T/48T
适用范围:仅供科研使用
保存及有效期:2-8℃保存,6个月,-20℃一年
使用方法:
测定法的灵敏度来自作为报告的酶。众所周知,酶是一种有机催化剂,很少量的酶即可诱导大量的催化反应,产生可供观察的显色反应现象。因此该体系常被称为酶放大体系。
1. 标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。 24μg/ml 5号标准品 150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液
12μg/ml 4号标准品
150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液
6μg/ml 3号标准品 150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液
3μg/ml 2号标准品 150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液
1.5μg/ml 1号标准品
150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液
2. 加样:分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。|
3. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4. 配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
7. 温育:操作同3。
8. 洗涤:操作同5。
9. 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.
10. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11. 测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
ELISA 试验时,注意事项如下:
1. 正式试验时,应分别以阳性对照与阴性对照控制试验条件,待检样品应作一式二份,以保证实验结果的准确性。有时本底较高,说明有非特异性反应,可采用羊血清、兔血清或BSA等封闭。
2. 在ELISA中,进行各项实验条件的选择是很重要的,其中包括:
(1) 固相载体的选择:许多物质可作为固相载体,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何种载体,在使用前均可进行筛选:用等量抗原包被,在同一实验条件下进行反应,观察其显色反应是否均一性,据此判明其吸附性能是否良好。
(2) 包被抗体(或抗原)的选择:将抗体(或抗原)吸附在固相载体表面时,要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0~9.6之间。吸附温度,时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃18~24小时。蛋白质包被的zui适浓度需进行滴定:即用不同的蛋白质浓度(0.1、1.0和10μg/ml等)进行包被后,在其它试验条件相同时,观察阳性标本的OD值。选择OD值zui大而蛋白量zui少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为1~10μg/ml。
(3) 酶标记抗体工作浓度的选择:首先用直接ELISA法进行初步效价的滴定(见酶标记抗体部份)。然后再固定其它条件或采取“方阵法”(包被物、待检样品的参考品及酶标记抗体分别为不同的稀释度)在正式实验系统里准确地滴定其工作浓度。
(4) 酶的底物及供氢体的选择:对供氢体的选择要**价廉、**、有明显地显色反应,而本身无色。有些供氢体(如OPD等)有潜在的致癌作用,应注意防护。有条件者应使用不致癌、灵敏度高的供氢体,如TMB和ABTS是目前较为满意的供氢体。底物作用一段时间后,应加入强酸或强碱以终止反应。通常底物作用时间,以10-30分钟为宜。底物使用液必须新鲜配制,尤其是H2O2在临用前加入 。
维生素D3 β-D-葡萄糖苷酸Vitamin D3 β-D-Glucuronide质量规格:美国进口 人胱天蛋白酶12(Casp-12)试剂盒 Human Caspase 12,Casp-12
ELISA Kit 人可溶性P选择素(sP-selectin)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
D,L-福莫特罗-D6 (主要的)D,L-Formoterol-D6 (Major)质量规格:美国进口 RatEsiol,E3ELISAKit大鼠雌三醇(E3)ELISA试剂盒规格:96T/48T 小鼠腺来源的血管内皮生长因子(EG-VEGF)试剂盒 Mouse Endocrine gland
vascular endothelial growth factor,EG-VEGF ELISA Kit
盐酸苄基Benzylhydrazine 质量规格:美国进口 6%蛋白电泳分离预制胶溶液500毫升 中性内肽酶/脑啡肽酶(NEP)ELISA试剂盒 ,英文名: NEP ELISA Kit
苄基Benzylhydrazine质量规格:美国进口
Mousegalactose-6-sulphatesulphatase,Gal-6SELISA试剂盒小鼠半乳糖6酯酶(Gal-6S)ELISA试剂盒规格:96T/48T
humanulasensitivethyroid-stimulatinghormone,U-TSHELISA试剂盒人高灵敏度促甲状腺(U-TSH)ELISA试剂盒规格:96T/48T
奈拉滨Nelarabine质量规格:>99.0%,细胞培养级 牛维生素D(VD)试剂盒 Bovine Vitamin D,VD ELISA Kit 人1酸化蛋白激酶C(P-PKC)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
醋酸奈西立肽Nesiritide Acetate质量规格:>95% 英文名称HumanMacrophageInflammatoryProtein-1β,MIP-1βELISAkit人巨噬细胞炎性蛋白-1β(MIP-1β)规格:96T/48T 小鼠热休克蛋白20(Hsp-20)试剂盒 Mouse Heat Shock Protein
20,Hsp-20 ELISA Kit
咪喹莫特Imiquimod质量规格:>99%,BR 电镜组织三固着液(2,4,6-imethylpyridinepuriss)50毫升 总胆汁酸(TBA)ELISA试剂盒 ,英文名: TBA ELISA Kit
咪喹莫特(标准品)Imiquimod质量规格:HPLC>98%,标准品 RatPepsin,PPELISA试剂盒大鼠胃蛋白酶(PP)ELISA试剂盒规格:96T/48T Humaissuefactorpathwayinhibitor,TFPIELISA试剂盒人组织因子途径抑制物(TFPI)ELISA试剂盒规格:96T/48T
胡黄连苷 II(标准品)质量规格:HPLC≥98%,标准品Picroside II
Humanproliferatingcellnuclearaigenaibody,PCNAELISAKit人抗增殖细胞核抗原抗体(PCNA)ELISA试剂盒规格:96T/48T 中性木聚糖酶测试盒 可见分光光度法 50管/24样
胡黄连苷 III(标准品)质量规格:HPLC≥98%,标准品Picroside III 豚鼠过氧化脂质/乳过氧化物酶(LPO)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
RatsolubleToll-likereceptor6,sTLR-6ELISA试剂盒大鼠可溶性Toll样受体6(sTLR6)ELISA试剂盒规格:96T/48T
胡萝卜苷(标准品)质量规格:HPLC≥98%,标准品Daucosterol Rat vasoactive iestinal peptide (VIP) ELISA
Kit 大鼠血管活性肠肽(VIP)ELISA试剂盒 HumanKallikrein11,KLK11ELISA试剂盒人激肽释放酶11(KLK11)ELISA试剂盒规格:96T/48T
V质量规格:HPLC≥98%,标准品Lup-20(29)-en-28-oic acid,
3-[β-D-glucopyranosyl(1→4)[a-L-rhamnopyranosyl) (1→2)-a
-L-arabinopyranosyl]oxy], (3β,4a)-) HumanAnnexinⅤ,ANX-ⅤELISAKit 人膜联蛋白Ⅴ(ANX-Ⅴ)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装 HumanNein-1,n1ELISAKit人轴突生长诱向因子1(n1)ELISA试剂盒规格:96T/48T
IL1ε人白介素1εelisa试剂盒检测程序:
1. 加样:每孔各加入标准品或待测样品 100ul ,将反应板充分混匀后置 37 ℃ 120 分钟。
2. 洗板:用洗涤液将反应板充分洗涤 4-6 次,向滤纸上印干。
3. 每孔中加入抗体工作液10 0ul 。将反应板充分混匀后置 37 ℃ 6 0 分钟。
4. 洗板:同前。
5. 每孔加酶标抗体工作液100ul 。将反应板置 37 ℃ 3 0 分钟。
6. 洗板:同前。
7. 每孔加入底物工作液100ul ,置 37 ℃ 暗处反应15 分钟。
8. 每孔加入100ul 终止液混匀。
9. 30分钟内用酶标仪在 45 0 nm 处测 吸光值。