产品名称：SK-N-FI细胞

实验要点及说明 ：
1．本方法适用于贴壁细胞培养，而不适用于悬浮细胞培养，悬浮细胞可使用滴片法； 
2．所使用的盖玻片应该为优玻璃**，并经过铬酸洗液处理； 
3．盖玻片非常薄，易碎，取放盖玻片时动作要轻； 
4．如果需要更多生长状态一致的细胞，可以使用较大的培养皿，但不宜过大，以避免培养液的浪费和增加污染机率； 
5．如果细胞贴壁生长能力较差，可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。

产品详细 脑神经母细胞瘤细胞
形态特性 上皮样
生长特性 贴壁生长
特征特性
培养条件 DMEM     O.1 mM Non-Essential Amino Acids (NEAA)

fetal bovine serum to a final conCA-ntration of 10%
传代方法 1:4传代，每周换液2次
我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，购买到货后，由我们实验室扩增、冻存，冻存的产品全部经过QC检测，100%进口来源，100%保证5代以内，活力>95%，无**、支原体污染。 细胞到达客户手中，1个月内出现任何问题，导致细胞在冻存前死亡，我们公司都可以免费再向客户提供一次。产品仅用于科学研究
实验材料： 
1. 50ml 配制好的RPMI1640培养液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 
2. 100ml烧杯2个； 人皮肤成纤维细胞,CCC-HSF-1细胞
3、50ml离心筒2个 
4、培养皿1个，细胞培养瓶1个 
5、1ml ，200μl移液器各1支；枪头盒2个；无菌玻璃搅拌棒1个 
6、细胞计数板1块； 
7、灭好菌的镊子1把，剪刀1把； 
8、酒精灯1台； 

培养细胞冻存方案：
以下实验方案介绍了培养细胞冻存的一般流程。详细的实验方案，必须参阅针对具体细胞的产品说明书。 
1.配制冻存培养基，于2°C至8°C下储存，直至使用。请注意使用何种冻存培养基取决于所用细胞系。
2.冻存贴壁细胞时，利用传代时所用方法轻柔地使细胞从组织培养容器上脱离下来。用该细胞所需完全培养基重新悬浮细胞。
3.采用血球计数器、细胞计数仪按照台盼蓝拒染法或者使用自动细胞计数仪测定总细胞数和活细胞百分比。根据所需活细胞密度，计算冻存培养基需要量。
4.以大约100-200×g的离心力将细胞悬液离心5至10分钟。在无菌条件下小心倒掉上清液，不要搅动细胞沉淀。
注：离心速度和时间取决于细胞种类。
5.用预冷的冻存培养基重新悬浮细胞沉淀，将其调整至该细胞适合的活细胞密度。
6.将细胞悬液分装到若干冻存管中。分装时，应不时轻轻混合细胞，使其保持均匀的细胞悬液状态。
7.使用可控制降温速度的冷冻装置冷冻细胞，使温度每分钟大约降低  1°C。或者，将装有细胞的冻存管放入冻存盒中，然后将冻存盒置于-80°C条件下过夜。 
培养操作步骤 ：
1．用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布； 
2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）； 
3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时； 
4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片完全浸在培养液中； 
5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及细胞化学检测。 
细胞毒 T 细胞相关抗原 4(CTLA-4)   作用：   ELISA   规格：   48T/96T   进口分装  Araliadiol  1354638-93-9  中文名：  分子式：C15H20O2  度：%  关键词：  ; 食用土当归; 聚乙炔; 植物提取物; 天然产物; 天然产物库

细胞凋亡抑制因子BCL-2   英文名称：   Cell appoptosis inhibitory BCL-2   规格：   48T/96T   英文缩写：   BCL-2  Antipyrine  60
胶原酶I型(sigma)  Collagenase, Type1  质量规格：≥125 CDU/mg ,Sigma分装 ELISAKitCys-C兔半胱氨酸蛋白酶抑制剂/胱抑素C规格：48T/96T

胶原酶II型(sigma)  Collagenase, Type2  质量规格：≥125 CDU/mg ,Sigma分装 小鼠胚胎干细胞系MESPU30(M30)ELISA试剂盒 ，英文名： M30 ELISA Kit

胶原酶IV型(sigma)  Collagenase, TypeIV  质量规格：≥160 CDU/mg,Sigma分装 小鼠Ⅰ型胶原(ColⅠ)ELISA检测试剂盒MouseCollageypeⅠ,ColⅠELISAKit 96T/48T

钼酸钠二水(AR)   molybdate  质量规格：>99%,AR 人肺炎衣原体抗体IgM(Cpn-IgM)试剂盒 Human Chlamydia pneumoniae aibody,Cpn-IgM ELISA Kit

硅酸镁（高）  Magnesium silicate  质量规格：>98% RatLeptieceptor,LR/Ob-RELISAKit大鼠苗条素受体(LR/Ob-R)ELISA试剂盒规格：96T/48T

L-抗坏血酸钠   L-ascorbate  质量规格：>98%,BR CMV(CYTOMEGALOVIRUS)病毒标准曲线定量PCR扩增检测试剂盒2

焦钠(AR)   pyrophosphate  质量规格：>99%,AR Mousemyeloperoxidase,MPOELISA试剂盒小鼠髓过氧化物酶(MPO)ELISA试剂盒规格：96T/48T

碳酸氢铵(AR)  Ammonium bicarbonate  质量规格：AR 小鼠膀胱肿瘤抗原(BTA)ELISA 试剂盒

氯化铵(AR)  Ammonium chloride  质量规格：>99.5%,AR Rat noradrenaline (NA) ELISA Kit 大鼠去甲(NA)ELISA试剂盒

水杨酸(AR)  Salicylic acid  质量规格：>99.5%,AR Humanurokinase-typeplasminogenactivator,uPA/PLAUELISAKit 人尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA/PLAU)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装
Bialaphos 双丙氨磷   0mg2,6-Dimethoxy-acetonylquinol22156

Bicine   g/25g/g2,6-Dimethoxy,4-benzoquinone552,6-二甲氧基对

Bis-Tris   5g /25g /0g 2,6-Bis(hydroxymethyl)-p-cresol1991/4/32,6-双(羟甲基)对甲酚

Bis-Tris propane   5g/25g2,6-Bis(2-benzimidazolyl)pyridine232,6-双(2-苯并咪唑基)吡啶

Bovogen BSA 低脂肪酸，无蛋白酶，低内   0g 2,5-Bis(5-tert-butyl-benzoxazolyl)thiophene712842,5-双(5-叔丁基-苯并恶唑基)噻吩
收到如何处理:
1、首先，观察培养瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象。若有，请拍照，并及时与技术支持联系（所拍照片将作为后续服务依据）。
2、用75%酒精擦拭细胞培养瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分贴壁细胞会有少量从瓶壁脱落；先不要打开培养瓶盖，将细胞置于细胞培养箱内静置培养2-4小时，以便稳定细胞状态。
3、仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如贴壁特性（贴壁/悬浮）、细胞形态、所用基础培养基、血清比例、所需细胞因子、传代比例、换液频率等。
4、静置完成后，取出细胞培养瓶，镜检、拍照，记录细胞状态（所拍照片将作为后续服务依据）；建议细胞传代培养后，定期拍照、记录细胞生长状态。
5、贴壁细胞：若细胞生长密度超过80%，可正常传代；若未超过80%，移除细胞培养瓶内培养基，预留5ml左右继续培养，直至细胞密度达80%左右再进行传代操作，瓶盖可稍微拧松。
6SK-N-FI细胞、悬浮细胞：将细胞培养瓶内液体全部转移至50ml无菌离心管内，1200rpm离心5min，离心后上清培养基可收集备用，管底细胞沉淀加入5ml培养基吹打、重悬。镜检时，若细胞密度超过80%，可将细胞悬液分至2个细胞培养瓶内培养，补加培养基至5ml；若细胞密度未超过80%，将细胞悬液移至原瓶继续培养，直至细胞密度达80%左右时再进行传代操作。