产品名称：Hs 274.T细胞

实验要点及说明 ：
1．本方法适用于贴壁细胞培养，而不适用于悬浮细胞培养，悬浮细胞可使用滴片法； 
2．所使用的盖玻片应该为优玻璃**，并经过铬酸洗液处理； 
3．盖玻片非常薄，易碎，取放盖玻片时动作要轻； 
4．如果需要更多生长状态一致的细胞，可以使用较大的培养皿，但不宜过大，以避免培养液的浪费和增加污染机率； 
5．如果细胞贴壁生长能力较差，可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。

产品详细 乳腺癌细胞
形态特性 成纤维细胞
生长特性 贴壁生长
特征特性
培养条件 DMEM+10%FBS
传代方法 1:2传代,每周换液2~3次。
我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，购买到货后，由我们实验室扩增、冻存，冻存的产品全部经过QC检测，100%进口来源，100%保证5代以内，活力>95%，无**、支原体污染。 细胞到达客户手中，1个月内出现任何问题，导致细胞在冻存前死亡，我们公司都可以免费再向客户提供一次。产品仅用于科学研究
实验材料： 
1. 50ml 配制好的RPMI1640培养液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 
2. 100ml烧杯2个； 人皮肤成纤维细胞,CCC-HSF-1细胞
3、50ml离心筒2个 
4、培养皿1个，细胞培养瓶1个 
5、1ml ，200μl移液器各1支；枪头盒2个；无菌玻璃搅拌棒1个 
6、细胞计数板1块； 
7、灭好菌的镊子1把，剪刀1把； 
8、酒精灯1台； 

培养细胞冻存方案：
以下实验方案介绍了培养细胞冻存的一般流程。详细的实验方案，必须参阅针对具体细胞的产品说明书。 
1.配制冻存培养基，于2°C至8°C下储存，直至使用。请注意使用何种冻存培养基取决于所用细胞系。
2.冻存贴壁细胞时，利用传代时所用方法轻柔地使细胞从组织培养容器上脱离下来。用该细胞所需完全培养基重新悬浮细胞。
3.采用血球计数器、细胞计数仪按照台盼蓝拒染法或者使用自动细胞计数仪测定总细胞数和活细胞百分比。根据所需活细胞密度，计算冻存培养基需要量。
4.以大约100-200×g的离心力将细胞悬液离心5至10分钟。在无菌条件下小心倒掉上清液，不要搅动细胞沉淀。
注：离心速度和时间取决于细胞种类。
5.用预冷的冻存培养基重新悬浮细胞沉淀，将其调整至该细胞适合的活细胞密度。
6.将细胞悬液分装到若干冻存管中。分装时，应不时轻轻混合细胞，使其保持均匀的细胞悬液状态。
7.使用可控制降温速度的冷冻装置冷冻细胞，使温度每分钟大约降低  1°C。或者，将装有细胞的冻存管放入冻存盒中，然后将冻存盒置于-80°C条件下过夜。 
培养操作步骤 ：
1．用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布； 
2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）； 
3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时； 
4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片完全浸在培养液中； 
5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及细胞化学检测。 
胃动蛋白2   英文名称：   Human Gasokine 2   规格：   48T/96T   英文缩写：   GKN-2  Androstenediol  521-17-5  中文名：雄烯二醇  分子式：C19H30O2  度：98.0%  关键词： 

胃蛋白酶抑制剂   5mg  Androstanolone acetate  中文名：雄诺龙醋酸酯  分子式：C21H32O3  度：98.0%

胃蛋白酶测试盒   可见分光光度法   50管/24样              Tetracain
异烟酸  Isonicotinic acid  质量规格：>98%,BR ELISAKitADR兔阿霉素规格：48T/96T

L-苹果酸  L-Malic acid  质量规格：>98%,BR 小鼠牛血清白蛋白(BSA)ELISA试剂盒 ，英文名： BSA ELISA Kit

蛋白酶K溶液(20 mg/ml)  Proteinase K Solution, 20 mg/ml  质量规格：20 mg/ml 人褪黑素(MT)ELISA检测试剂盒HumanMelatonin,MTELISAKit 96T/48T

多聚赖氨酸0.1%溶液  Poly-L-lysine solution ( 0.1%)  质量规格：M.W:150,000~300,000 大鼠载脂蛋白C-I(APOC1)试剂盒 Rat apolipoprotein C-I,APOC1 ELISA kit

盐酸四环素溶液,50 mg/ml  Tetracycline  solution, 50 mg/ml, sterile  质量规格：50 mg/ml,装 英文名称HumanE-CadherinELISAKit人E-钙粘附分子(E-Cadherin)规格：96T/48T

D-葡糖糖-6-二钠二水  D-Glucose-6-phosphate, di, dihydrate  质量规格：>99%,BR 动物组织总ATP酶(totalATPase)活性比色法定量检测试剂盒20

丁二酸钠(AR)   succinate  质量规格：AR,>99% ELISAKitAβ1-40兔β淀粉样蛋白1-40规格：48T/96T

牛血红蛋白  Hemoglobin  质量规格：BR 小鼠牛血清白蛋白(BSA)ELISA 试剂盒

聚乙二醇10000  PEG 10000  质量规格：分子量9,000~11,000 Rat methylase ELISA Kit (Methylase) 大鼠甲基化酶(Methylase)ELISA试剂盒

DL-苹果酸  DL-Malic acid  质量规格：>98%,BR Humandynamin2,DNM2ELISAKit 人发动蛋白2(DNM2)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装
Anti-TNFα单克隆抗体大于1mg9,9-Bis[4-(2-hydroxyethoxy)phenyl]fluorene11734429,9-双[4-(2-羟乙氧基)苯基]芴

Anti-IL6R单克隆抗体大于1mg9,9-Bis(4-hydroxyphenyl)fluorene323619,9-双(4-羟苯基)芴

Anti-IL12单克隆抗体大于1mg9,9-Bis(4-amino-methylphenyl)fluorene7934,9-双(4-氨基-甲苯基)芴

IL2(human、his标签）0ug9,17-Octadecadiene2,14-diyne,11,16-triol211238-

IL2(human、无标签）0ug9,16-Dioxo0,12,14-octadecatrienoic acid21786
收到如何处理:
1、首先，观察培养瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象。若有，请拍照，并及时与技术支持联系（所拍照片将作为后续服务依据）。
2、用75%酒精擦拭细胞培养瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分贴壁细胞会有少量从瓶壁脱落；先不要打开培养瓶盖，将细胞置于细胞培养箱内静置培养2-4小时，以便稳定细胞状态。
3、仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如贴壁特性（贴壁/悬浮）、细胞形态、所用基础培养基、血清比例、所需细胞因子、传代比例、换液频率等。
4、静置完成后，取出细胞培养瓶，镜检、拍照，记录细胞状态（所拍照片将作为后续服务依据）；建议细胞传代培养后，定期拍照、记录细胞生长状态。
5、贴壁细胞：若细胞生长密度超过80%，可正常传代；若未超过80%，移除细胞培养瓶内培养基，预留5ml左右继续培养，直至细胞密度达80%左右再进行传代操作，瓶盖可稍微拧松。
6Hs 274.T细胞、悬浮细胞：将细胞培养瓶内液体全部转移至50ml无菌离心管内，1200rpm离心5min，离心后上清培养基可收集备用，管底细胞沉淀加入5ml培养基吹打、重悬。镜检时，若细胞密度超过80%，可将细胞悬液分至2个细胞培养瓶内培养，补加培养基至5ml；若细胞密度未超过80%，将细胞悬液移至原瓶继续培养，直至细胞密度达80%左右时再进行传代操作。